| 主任研究者 | 立花克彦 (神奈川県立こども医療センター) |
| 共同研究者 | 勝又規行 (国立成育医療センター研究所) |
| 島津 章 (国立京都病院) | |
| 肥塚直美 (東京女子医科大学第二内科) | |
| 藤枝憲二 (旭川医科大学小児科) | |
| 横谷 進 (虎の門病院小児科) |
はじめに
われわれは、これまでに市販キットについて補正式を作成する一方、測定キットによって測定結果が異なる原因を追究した。その結果、用いる標準品の違いがその原因の大部分であり、共通の標準品を使用して検体を測定すれば、測定値がほぼ一致することを示した。
今年度も、現在市販されている７種の測定キットについて検討し、補正式を作成した。さらに標準品の違いが測定値の違いであることを再確認するとともに、キット販売各社の協力を得て、キットによる測定値の違いをなくすため共通の標準品を使用する方向での検討を進めている。
方法
同時に、日本ケミカルリサーチ（JCR） 社より入手したリコンビナント22Ｋヒト成長ホルモンを希釈して標準品とし、それを用いた場合の各々の測定キット(協和キット、ベックマンキットを除く)による測定値を求め、比較した。このJCR社製リコンビナントGHは国立衛生試験所(現在、国立医薬品食品衛生研究所)のヒト成長ホルモン標準品(Control 951)或いはNIBSC Code No.88/624を基準に同社の社内標準品を検定し、更にこの社内標準品を基準に定量されたものである。
なお、この検討は以前は中央で集中的に行っていたが、昨年度同様今年度はキット販売各社によって、リコンビナントGH標準駅の作成から測定まですべて独自に行われた。
結果
協和キット以外の各社キットの付属標準品を用いての測定結果の平均を従属変数として線形関係式を用いて作成した補正式を表１に示す。（協和キットについては現行の標準品のキットについてはデータがないため成長科学協会の適応判定には昨年の補正式を用いることとした。）
考察
現在、各測定キットの標準品はWHOの標品を一次標品とし、それに対して各メーカーは二次標品を作成し、キット添付の標準品は二次標品に対して検定されている。しかし、同じWHO標品といっても、全く同一のWHO標品が用いられているわけではない。現在日本で市販されているGH測定キットで用いられている標準品は、これまで2種のWHO標品（No.66/217、No.80/505）に準拠していた。これら二種の標品はいずれも下垂体抽出品であるが、GH含有量に差がある。即ち、違うGH含有量の基準を用いているのであるから測定値が異なるのは当然のことといえる。われわれは、リコンビナントGHを希釈したものを共通の標準品として用いると、同一検体の測定値は各測定キットによってほぼ一致することを示し、今回の検討でも同様の結果であった。即ち現在市販されているGH測定キット間の測定値の乖離の原因の（すべてではないにせよ）大部分は、この標準品の実際のGH含有量の違いに起因すると思われる。
現在ではGH含有量を正確に知ることのできるリコンビナントGHが入手可能であり、このことは時代を超えて同じ標準品を用意することを可能にすると期待される。今回使用したJCR社製リコンビナントGHはこの条件を満たすリコンビナントGHのひとつであるといえる。これまでわが国の市販キットが準拠していた2種のWHO標品（No.66/217、No.80/505）以降、WHOから供給されるようになった標品は、リコンビナントGHのNo.88/624であった。Growth hormone research societyの小児のGHDの診断と治療についての提言でも、No.88/624を基準として用い、モノクローナル抗体を用いた測定キットで測定することが推奨されている。
これらの結果をもとに、我々は、今後、各キットの一次標品・二次標品を、さらには実際のキットに添付する標準品をもリコンビナントGHにするのが望ましいと考え、各キットメーカーに対応を要請し、検討会を繰り返し行った。幸い、各キットメーカーとも積極的で、一次・二次標品、そして添付標準品もリコンビナントGHとする方向で一致を見た。そして、各社とも技術的には新しいリコンビナントGH の標準品をキットに添付することが可能で、これが実現すれば使用するキットによって測定値が異なるという事態はほぼ解消される。しかし現実に標準品を変更するとなると、安定性の検討、規制当局による認可の問題などなど、短時間では解決できない問題も多く、すぐに実現するには至っていない。今後、さらに各メーカーと協力して、測定値の乖離をなくす努力を続ける必要がある。又、今後の新規のGH測定キットについても、働きかけを行う必要がある。
ここでリコンビナントＧＨを標準とするに際して新しい問題がある。ひとつには、これまでわれわれはリコンビナントＧＨとしてNo.88/624に準拠したＪＣＲ社製リコンビナントＧＨを用いてきた。しかし、このNo.88/624は現在入手できなくなり、現在はさらに新たなＷＨＯ標品はやはりリコンビナントのNo.98/574となっている。このことはリコンビナントＧＨを用いての測定になにか影響をもたらさないだろうか。たとえ共にリコンビナントであっても2量体などの割合の違いで免疫学的測定において違いを生ずる可能性も否定できないからである。しかし、No.88/624によって準拠しているＪＣＲ社製リコンビナントＧＨを用いたいくつかのキットの測定値とNo.98/574に準拠した標準品の協和キットによる測定値はほぼ一致した。また東ソーキットでＪＣＲ社製、No.88/624、No.98/574の3種のリコンビナントＧＨを標準として検体を測定した結果では図３に示したように、すべてほぼ一致した。このことから少なくともＪＣＲ社製、No.88/624、No.98/574の3種のリコンビナントについてはどれを用いても測定値はキットに関わらずほぼ一致するものと期待され、補正は不要と思われた。
もうひとつの問題は図４に示されるように、リコンビナントGHを標準品として用いると、測定値はこれまでの測定値に比べてかなり低下することである。そのため正常児でも負荷試験の際のGH頂値がかなり低値となる。GHDの診断のためのGH分泌刺激試験におけるGH頂値の10ng/ml、5ng/mlといった現在用いられているカットオフ値は、二抗体法RIAによる測定が行われていた時代に経験的に設定されたものである。従って、リコンビナントGHを標準品として用いた測定値をこれにそのままあてはめることはできない。では、リコンビナントGHを標準にして測定した場合にはどのようなカットオフ値を用いればよいのであろうか。
多くの正常児で負荷テストを行い年齢別、性別、負荷試験の種類別に正常範囲を新たに設定できれば良いが事実上不可能である。とすれば、現在広く使用されているGH分泌刺激試験におけるGH頂値の10ng/ml、5ng/mlといったカットオフ値をリコンビナントGHを用いての測定用に修正することとなろう。二抗体法RIAでの測定値との換算が行いえればそれが望ましいが、現在では不可能である。とすれば、現在行われている判定( 診断)と大きく異ならないようにするのが混乱を避ける意味からも現状としては最善と思われる。表2に最近4年間の補正式の作成の資料から、各キットについて補正後の測定値（すなわち現在の測定値）とリコンビナントGHを標準にした場合の測定値の相関式を示した。これを見ると、リコンビナントGHを用いての測定値は補正値の約0.6倍である。したがって、リコンビナントGHを用いての測定の場合、現在のGHD診断の手引きなどに見られるGH頂値の10ng/ml、5ng/mlといったカットオフ値は6ng/ml、3ng/mlと読み替えるのが妥当かと思われる。この際混乱を避けるため、リコンビナントGHを標準にした場合の測定値についてはしばらくはng/ml（リコンビナント）といったように明示することを推奨したい。
